La obtención de células
competentes en E. coli consiste en ir concentrando un cultivo recogido en fase
logarítmica, mediante lavados sucesivos en una solución fría (4ºC) de Cl2Ca,
tras lo cual la mezcla de células y ADN se someten a unos 2 min. a 42ºC (choque
por calor). Este tratamiento altera las envueltas (sobre todo la membrana
externa) y aumenta su permeabilidad al ADN. Los plásmidos (pueden de especies similares
o diferentes) entran a la célula como moléculas de cadena doble intactas,
mientras que los ADN lineales, que entran de la misma forma, son degradados por
nucleasas citoplásmicas (RecBCD). Los transformantes se suelen seleccionar en
base a la resistencia a algún o algunos antibióticos conferidos por los
plásmidos artificiales usados en Ingeniería Genética
Pero también se puede llevar
acabo la transferencia del ADN de forma artificial. Esto con la intervención
del humano, llevando acabo diferentes técnicas para hacer mejoramientos de
organismos, utilizando diferentes especies y entre diferentes especies.
recombinando el ADN de los organismos. También por que muchas especies de
bacterias carecen de sistemas naturales de transformación.
En los últimos años se ha
logrado desarrollar sistemas artificiales para producir “células competentes”
en algunas de ellas (como Escherichia coli, Salmonella typhimurium y algunas especies de Pseudomonas), lo cual ha
hecho avanzar los estudios genéticos, especialmente mediante manipulaciones in
vitro: por ejemplo, la transformación artificial de E. coli con ADN plasmídico
es una de los métodos básicos de la Ingeniería Genética.
La transformación es la
transferencia genética que resulta de la incorporación de DNA desnudo por una
célula receptora desde una célula donadora. Ciertas bacterias (ej. Bacillus,
Haemophilus, Neisseria, Pneumococcus) son capaces de tomar DNA del medio
ambiente y ese DNA que es introducido puede llegar a ser incorporado al
cromosoma de la célula bacteriana receptora. Esto se llama transformación
natural. Porqué si puede ser transferido ADN entre bacterias de especies
diferentes?. Porqué lo que se requiere para que se lleve correctamente la
transferencia por transformación es que exista homología entre el ADN de la
bacteria donante y el ADN de la bacteria
receptora, esto para que se pueda llevar la recombinación adecuadamente. Es
decir, cualquier porción del genoma de la célula donante puede incorporarse,
siempre y cuando sea igual o similar a la de la célula receptora. El DNA de la
célula donante para que pueda ser incorporado al cromosoma de la célula
receptora y no tenga ningún problema para ser incorporado debe tener las
siguientes características: debe ser de doble hélice, similar al DNA de la
célula receptora, por que el ADN de la
bacteria donadora que entra a la bacteria receptora, se pega en la región que
exista mayor homología entre las bases, esto para que se lleve acabo la
recombinación del ADN, debe tener bajo peso molecular y tamaño pequeño. Con estas características la
bacteria que las presente, puede ser donadora para otras, sin necesidad de
pertenecer a la misma especie. Pueden ser de diferentes especies o cercanas.
Con estas recombinaciones se ha logrado que numerosas bacterias sean inmunes a
diferentes antibióticos y como consecuencia se hacen más fuertes y logran
transmitir esas características a sus descendientes, cuando se dividen.
BIBLIOGRAFIA
